誘導(dǎo)培養(yǎng)基和增殖培養(yǎng)基的配制需基于植物種類、外植體類型及實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)進(jìn)行精準(zhǔn)設(shè)計(jì),但其核心流程一致:?以合適的基礎(chǔ)培養(yǎng)基為載體,添加特定比例的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑,并嚴(yán)格控制理化條件。以下是系統(tǒng)性配制方法:
一、通用配制流程(適用于大多數(shù)植物組織培養(yǎng))
無(wú)論誘導(dǎo)或增殖階段,培養(yǎng)基配制均遵循以下步驟:
計(jì)算與稱量
根據(jù)目標(biāo)培養(yǎng)基配方,精確稱取大量元素、微量元素、鐵鹽、維生素、蔗糖、瓊脂及植物激素。
溶解與混合
將各成分依次加入約2/3體積的蒸餾水中,加熱攪拌至完全溶解(瓊脂需加熱熔化)。
調(diào)節(jié)pH值
使用0.1 mol/L NaOH或HCl將培養(yǎng)基pH調(diào)整至5.8(多數(shù)植物適宜范圍為5.6–6.0)。
定容與分裝
加蒸餾水定容至所需體積,分裝入三角瓶或試管中。
加塞包扎與滅菌
用棉塞封口,外包牛皮紙,采用高壓蒸汽滅菌(121℃、0.103 MPa,維持15–20分鐘)。
無(wú)菌檢查與保存
滅菌后于37℃恒溫培養(yǎng)24–48小時(shí)確認(rèn)無(wú)菌,隨后置于2–8℃避光保存?zhèn)溆谩?br />
關(guān)鍵提示:激素應(yīng)在滅菌前加入,但對(duì)熱敏感的物質(zhì)(如某些抗生素)可在冷卻至約60℃時(shí)再添加。
二、誘導(dǎo)培養(yǎng)基的特異性配制要點(diǎn)
誘導(dǎo)培養(yǎng)基的核心是?啟動(dòng)細(xì)胞脫分化或器官發(fā)生,常用于外植體初代接種。
常見配方結(jié)構(gòu):
基礎(chǔ)培養(yǎng)基:MS培養(yǎng)基最常用,營(yíng)養(yǎng)全面。
植物激素組合:
細(xì)胞分裂素(如6-BA):0.5–2.0 mg/L,促進(jìn)芽原基形成;
生長(zhǎng)素(如NAA或2,4-D):0.1–0.5 mg/L(誘導(dǎo)芽),或更高濃度用于愈傷組織誘導(dǎo)。
附加成分:蔗糖30 g/L,瓊脂6–7 g/L(固體培養(yǎng)基)。
三、關(guān)鍵差異總結(jié)
實(shí)踐建議:可通過預(yù)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化激素配比,結(jié)合外植體響應(yīng)動(dòng)態(tài)調(diào)整方案。
四、增殖培養(yǎng)基的特異性配制要點(diǎn)
增殖培養(yǎng)基旨在?高效擴(kuò)增已形成的不定芽或叢生芽,強(qiáng)調(diào)繁殖系數(shù)與遺傳穩(wěn)定性。
常見配方結(jié)構(gòu):
基礎(chǔ)培養(yǎng)基:MS或WPM,部分植物使用1/2MS以降低鹽分抑制。
植物激素組合:
細(xì)胞分裂素(如6-BA):濃度?高于誘導(dǎo)階段?(如3.0–4.0 mg/L),強(qiáng)烈促進(jìn)腋芽萌發(fā);
生長(zhǎng)素(如NAA):濃度?低于誘導(dǎo)階段(如0.1 mg/L),避免過度生根或愈傷化。
可選添加物:活性炭(0.02%)用于吸附有害代謝物,提高芽質(zhì)量。