MH-S細(xì)胞為半貼壁半懸浮生長(zhǎng)的轉(zhuǎn)化細(xì)胞系，對(duì)凍存與復(fù)蘇過(guò)程較為敏感，因此規(guī)范的凍存操作是維持其活性、功能和遺傳穩(wěn)定性的重要保障。以下是詳細(xì)的保存建議：
MH-S細(xì)胞凍存關(guān)鍵步驟
?選擇合適時(shí)機(jī)?
在細(xì)胞處于?對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期、狀態(tài)良好且未污染?時(shí)進(jìn)行凍存，通常在傳代前一晚?yè)Q液，確保細(xì)胞健康活躍 。
?消化與收集細(xì)胞?
棄去舊培養(yǎng)基，用不含鈣鎂離子的PBS輕柔潤(rùn)洗一次。
加入0.25%胰酶-EDTA（T25瓶加1 mL），37℃消化1–2分鐘，顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓即終止 。
加入含10% FBS的完全培養(yǎng)基終止消化，輕柔吹打混勻。
將懸浮細(xì)胞與消化后的貼壁細(xì)胞合并，1000 rpm離心5分鐘，棄上清。
?配制凍存液?
推薦配方：
?55% RPMI-1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基?
?40% 胎牛血清（FBS）?
?5% DMSO（二甲基亞砜）?
注意：DMSO需現(xiàn)用現(xiàn)配，避免毒性積累；也可使用市售無(wú)血清凍存液替代 。
?重懸與分裝?
用預(yù)冷的凍存液重懸細(xì)胞，調(diào)整密度至 ?5×10? ~ 1×10? cells/mL?。
分裝至2 mL凍存管中，每管0.25–1 mL，標(biāo)記細(xì)胞名稱(chēng)、代次和日期。
?程序降溫?
將凍存管放入?程序降溫盒?中（或置于-80℃冰箱過(guò)夜），再轉(zhuǎn)入液氮長(zhǎng)期保存。
若無(wú)程序降溫設(shè)備，可采用梯度降溫法：4℃ 30 min → -20℃ 2 h → -80℃ 2 h → 液氮 。
?長(zhǎng)期儲(chǔ)存?
?液氮?dú)庀嘀锌砷L(zhǎng)期保存?（>5年），避免直接浸入液相以防凍存管破裂或污染 。
建議每半年復(fù)蘇一支檢測(cè)細(xì)胞活性，確保凍存質(zhì)量。
